在免疫印跡實驗中遇到的質控問題之一最常見的就是高背景。當一個高的背景發生時，很難從不相關的數據中區分出相關的數據。一個常見的高背景可以由于很多原因導致同時需要一些工作來解決 -- 因為不解決這些問題，這個印跡無法讀取.

保證緩沖液沒有被污染

   一個被污染的緩沖液在免疫印跡中很容易導致高的背景。大多數情況下，由于細菌的存在會導致被污染的緩沖液 -- 但是也有其他的污染物. 當污染物進入到緩沖液中后，他們會影響整個印跡的整體, 包括背景. 解決這種干擾的辦法是將舊的緩沖液全部扔掉，重新配置新緩沖液。

確保操作步驟是*恰當的

   另外一個能夠導致高背景的原因是沒有進行恰當的操作步驟。差的膜操作，膜過度曝光， 以及不足的漂洗都會導致高背景。這些問題可以通過恰當操作來解決。當膜變干的時候膜的糟糕操作通常會發生。如果沒有使用正確的化學試劑恰當的潤濕膜會變干; 通常來說是甲醇.

膜的過度曝光也是一個問題 -- 但是它很容易解決. 你所要做的是將膜曝光的時間縮短. 同樣的，不充分的漂洗只是需要將沖洗更加充分*. 漂洗用來去掉過量的抗體. 當很多抗體存在印跡上時，很難將印跡和背景區分開來。改進的漂洗也可以通過使用更好的漂洗溶液來進行。

去除不充分的封閉

    沒有正確的封閉, 免疫印跡的結果無法容易讀取. 不充分的封閉通常發生因為在孵育過程中的問題. 如果孵育的時間不足夠長，正確的區域不能得到封閉. 如果孵育的溫度不正確的話,封閉也不能完成. 也有化學試劑可以加入到這個過程中來進一步提高封閉. 

保證封閉劑的兼容性

   封閉劑, 如同在印跡實驗中使用的其他產品一樣，需要根據特定的應用進行調整. 使用錯誤的封閉劑很容易導致干擾和很差的難區分的印跡. 一些封閉劑基于血清蛋白的，而其他的是基于蛋白的。不同的抗體可以和封閉劑有潛在反應，所以有必要找到最合適的封閉劑. 無蛋白的封閉劑是良好封閉劑之一也是最容易的溶液.

降低抗體的濃度

  通常高濃度的抗體會導致高的背景. 因為抗體濃度太高了，整個膜會被抗體所包被. 這會使得出決定性的結論很難. 當提到高濃度的抗體，只有很少一些解決方案可以解決?？贵w可進行恰當漂洗或更低濃度的抗體可以被使用. 膜或許也需要恰當的處理 -- 只要沒有過度干掉 -- 它不會吸收很多的抗體溶液. 

高背景也會發生當使用的化學試劑和耗材不合適或質量很差. 在免疫印跡中高背景是經常顯著發生的多種問題之一。. 

其他需要考慮的因素之前已經討論了就是轉印膜的選擇: PVDF膜或硝酸纖維素膜  - 哪種膜最好?.  一個經常被忽視的問題是膜的效期.  在使用膜之前, 確保它沒有過期同時被正確儲存。

華雅思創生物——G-Biosciences全國授權代理

       華雅思創生物集團的集團子公司——上海華雅思創生物科技有限公司是一家為生命科學領域內的科學研究、細胞治療和生物制藥相關人員提供優質產品和服務的生物高科技公司，公司主辦的干細胞搜網(ys-bio,cn)為中國干細胞領域大資源庫，網站提供：干細胞治療產品、細胞培養試劑耗材、臍帶MSC間充質干細胞培養基、IPS細胞ES胚胎干細胞培養基、DC細胞淋巴細胞無血清培養基、R&D細胞因子等種類豐富的產品；涉及StemCell、HY StemCell、StemRD、CellGenix、PeproTech、Corning、Thermo、Gibco、 PALL、LONZA、BD等國際公司品牌和。以“Yes Service"核心服務理念，緊緊圍繞“Yes Service focus on Biology 越服務 專注生物"打造中華民族全新服務體系，我們與客戶攜手一起探索生命科學奧秘，解決人類健康問題，發展綠色環保生態，推動世界和諧持續發展。