心臟組織單細胞解離酶MJ001專為人、小鼠、大鼠等動物心臟組織單細胞懸液制備設(shè)計，通過多元復(fù)合酶的溫和酶解作用將心臟組織高效解離成為單個細胞懸液，在高得率的同時能夠獲得高活性的單細胞，后續(xù)適用于單細胞測序、流式細胞分析、流式細胞分選、原代細胞培養(yǎng)、類器官3D培養(yǎng)等實驗。

使用方法

1、溶解酶干粉

初次啟用試劑盒時執(zhí)行該操作步驟。將A瓶中的酶干粉用力甩至瓶底；然后用移液槍取B瓶中的溶解液反復(fù)吹打A瓶中的酶干粉并轉(zhuǎn)移至B瓶中，必要時可將槍頭口用剪刀剪大，確保A瓶中酶干粉全部轉(zhuǎn)移至B瓶中；隨后蓋緊B瓶瓶蓋上下顛倒B瓶直至酶干粉完·全溶解，必要時可放置搖床上搖晃至完·全溶解，完·全溶解的酶溶液呈現(xiàn)清澈微棕色。

2、過濾分裝解離酶

在A瓶中酶干粉完·全溶解在B瓶溶解液后，根據(jù)后續(xù)實驗如需要無菌解離組織，則需用注射器和0.22μm無菌過濾器過濾除菌后分裝。建議每5mL分裝一瓶，分裝至A瓶中，分裝后應(yīng)立即凍存在-20℃或-80℃冰箱中，可保存6個月。單次未使用完可凍存后下次繼續(xù)使用，但反復(fù)凍融不要超過三次，每凍融一次酶活會降低一部分，酶活降低時可增加酶的使用量以增強酶解效果。

3、酶解實驗操作

(1)實驗準備：預(yù)制碎冰，冰上解凍單細胞解離酶和酶解終止液，單細胞解離儀器開機預(yù)熱，PBS預(yù)冷，眼科剪、鑷子等無菌手術(shù)器械，40 μm無菌細胞篩，離心管、離心機等預(yù)冷。

(2)組織收集：無菌條件下收集組織，立即置于冷的PBS中，盡可能4h內(nèi)處理，如需放置更長時間，請使用高活性組織保存液（貨號MJ104）。

(3)清洗組織：將組織用冷PBS洗1-2次以去除血液、壞死組織等雜質(zhì)，稱重記錄。

(4)剪碎組織：將清洗過的組織轉(zhuǎn)移至解離管中，用鋒利眼科剪碎成1-2 mm3小塊，剪至泥糊狀，剪得越碎酶解就越充分，單細胞酶解時間就會越短；如有配備組織單細胞解離儀，覺得剪碎較麻煩也可不用嚴格剪碎，同樣能獲得較好的解離效果。

(5)酶解組織：組織剪碎后，取適量單細胞解離酶加入解離管中，上下顛倒解離管使解離酶與組織充分混勻。

①如配備有組織單細胞解離儀，可按照儀器操作規(guī)范進行單細胞解離。本產(chǎn)品適用市面上所有進口或國產(chǎn)品牌的組織單細胞解離儀，但需注意本產(chǎn)品解離效率比自備酶或其他競品的酶都高，解離時間可減少至少一半，需每隔5-10min確認一下解離情況，不同組織解離完·全的時間從5min到50min不等，在保證解離效果情況下盡可能減少酶解時間，酶解完·全即可終止酶解；

②如未配備組織單細胞解離儀，也可進行手動解離。在剪碎組織步驟中需嚴格按照要求剪碎組織；根據(jù)組織和所加酶體積選擇在1.5mL EP管或5mL EP管中，將解離酶與組織充分混勻，用剪刀將1mL移液槍槍頭口稍微剪大后，用移液槍用力吹打混合物，如吹打堵塞槍頭說明組織剪碎不夠徹·底，可繼續(xù)剪碎組織或?qū)岊^再剪大一些，保證能用移液槍反復(fù)吹打混合物，反復(fù)吹打十余次后立即放入37℃培養(yǎng)箱、水浴或金屬浴中孵育，有搖床效果更佳，每孵育5分鐘需進行一次反復(fù)吹打，直至組織團塊完·全解離成單細胞懸液。

(6)單細胞過濾：待組織完·全解離后，立即瞬離解離管3s，并將解離管插在冰上，用移液槍吸取上清通過40 μm的濾網(wǎng)進行過濾，過濾全程在冰上操作。

(7)終止酶解：取等量的酶解終止液（貨號MJ102）或完·全培養(yǎng)基進行終止酶解。

(8)收集細胞：4℃、400g離心5分鐘后棄上清，用預(yù)冷的PBS清洗后再離心棄上清。

(9)紅細胞裂解：取適量紅細胞裂解液（貨號MJ103）重懸細胞沉淀，冰上孵育10分鐘，間歇吹打輕搖，4℃、300g離心5分鐘后棄上清。

(10)清洗：取預(yù)冷的PBS重懸，4℃、300g離心5分鐘后棄上清，重復(fù)清洗2次。

(11)去除碎片：如碎片較多，可用高效碎片去除劑（貨號MJ101）去除碎片。

(12)細胞活性檢測：臺盼藍或AOPI染色，活細胞率應(yīng)＞85%。

(13)細胞凍存：如單細胞解離后暫時無法進行后續(xù)實驗，可使用高效高活細胞凍存液（貨號MJ105）將單細胞重懸后直接凍存于-80℃，可凍存數(shù)年。

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